分子生物学常用溶液配制-牛彩网正版

一、分子生物学常用贮存液的配制
1.30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】将29g丙怖酷胶和1gn,n’-亚甲双丙怖酷胶溶于总体积为60ml 的水中。加热至37校溶解之, 补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的ph 值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙怖酷胶具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙怖酷胶和亚甲双丙怖酷胶时应戴手套和面具。可认为聚丙怖酷胶无毒, 但
也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙怖酷胶和双丙怖酷胶通常含有一些金属离子,在丙怖酷胶贮存液中加入大约0.2 体积的单床混合树脂(mb-1mallinckrodt),搅拌过夜,然后
用whatman1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间,丙怖酷胶和双丙怖酷胶会缓慢转化成丙怖酷和双丙怖酸。2.40%丙烯酰胺
【配制方法】把380g丙烯酰胺(dna测序级)和20gn,n’-亚甲双丙烯酰胺溶 于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,
但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1l。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于dna 序列测定。3.放线菌素d 溶液
【配制方法】把20mg 放线菌素d溶解于4ml100%乙醇中,1:10 稀释贮存液,
用100%乙醇作空白对照读取od440值。放线菌素d(分子量为 1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素d溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素d的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。【注意】放线菌素d 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素d制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素d的浓度,这类制品便可用于
抑制自身引导作用。
4.0.1mol/l 腺苷三磷酸(atp )溶液
【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg atp,用0.1mol/l naoh调至ph 值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
5.10mol/l乙酸酰溶液
【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1l 后过滤除菌。6.10%过硫酸铵溶液
【配制方法】把1g 过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
7.bcip溶液
【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(bcip)溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
8.2×bes 缓冲盐溶液
【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液bes[n ,n-双-2-氨基乙磺酸 、1.6g nacl 和0.027gna2hpo4,室温下用hcl 调节该溶液的ph 值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用 0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
9.1mol/l cacl2 溶液
【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g cacl2 ·6h2o,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
10.2.5mol/lcacl2 溶液
【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g cacl2·6h2o,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
11.1mol/l 二硫苏糖醇(dtt)溶液
【配制方法】用 20ml0.01mol/l乙酸钠溶液(ph5.2)溶解3.09g dtt,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】dtt 或含有dtt的溶液不能进行高压处理。
12.脱氧核苷三磷酸(dntp)溶液
【配制方法】把每一种dntp 溶解于水至浓度各为100mmol/l 左右,用微量移 液器吸取0.05mol/ltris 碱分别调节每一dntp溶液的ph值7 .0(用ph 试纸检测 ),把中和后的每种dntp 溶液各取一份作适当稀释, 在下表中给出的波长下读取光
密度计算出每种dntp的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/l的
dntp,分装成小份贮存于-70℃。
13.0.5mol/l edta(ph8.0)溶液
【配制方法】在800ml水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(edta-na·2h2o),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用naoh 调节溶液的ph 值至8.0(约需20gnaoh 颗粒)然后定容至1l,分装后高压灭菌备用。
【注意】edta 二钠盐需加入naoh 将溶液的ph 值调至接近8.0,才能全溶解。14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)
【配制方法】在 100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。
【注意】小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。
15.2×hepes缓冲盐溶液
【配制方法】用总量为 90ml的蒸馏水溶解1.6g nacl、0.074g kcl、0.027g
na2po4·2h2o、0.2g葡聚糖和1ghepes,用 0.5mol/l naoh调节ph 值至7.05,
再用蒸馏水定容至100ml。用 0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份, 贮存于-20℃。
16.iptg溶液
【配制方法】iptg为异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸 馏水中溶解2g iptg后,用蒸馏水定容至10ml,用 0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
17.1mol/l乙酸镁溶液
【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1l过滤除菌。18.1mol/l mgcl2溶液
【配制方法】在800ml水中溶解203.4g mgcl2·6h2o,用水定容至1l,分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】mgcl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。19.β- (bme)溶液
【配制方法】一般得到的是14.4mol/l 溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】bme 或含有bme 的溶液不能高压处理。
20.nbt 溶液
【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
21.酚/氯仿溶液
【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/l tris·hcl(ph7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/ltris·hcl(ph=7.6)液层,保存于4℃。
【注意】酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清
洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
22.10mmol/l (pmsf)溶液
【配制方法】用异丙醇溶解pmsf 成1.74mg/ml(10mmol/l),分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/l)。
【注意】pmsf 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了pmsf,应立即用大量水冲洗之。凡被
pmsf污染的衣物应予丢弃。
pmsf 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
pmsf 在水溶液中的活性丧失速率随ph 值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。ph 值为8.0时,20μmmol/l pmsf水溶液的半寿期大约为85min,这表明将pmsf 溶液调节为碱性(ph>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。23.磷酸盐缓冲溶液(pbs)溶液
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g nacl、0.2g kcl、1.44gna2hpo4和0.24gkh2po4,用hcl 调节溶液的ph 值至7.4 加水定容至1l,在15lbf/in2(1034×105pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24.1mol/l乙酸钾(ph=7.5)溶液
【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/l乙酸调节ph 值至
7.5 后加入纯水定容到1l,保存于-20℃。
25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)
【配制方法】在60ml5mol/l乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即
成钾浓度为3mol/l而乙酸根浓度为5mol/l的溶液。
26.3mol/l乙酸钠(ph5.2和ph7.0 )溶液
【配制方法】在80ml水中溶解408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调节ph 值至5.2或用稀乙酸调节ph 值至7.0,加水定容到 1l,分装后高压灭菌。
27.5mol/l nacl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g nacl 加水定容至1l,分装后高压灭菌。28.10%十二烷基硫酸钠(sds)溶液
【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级sds,加热至68℃助溶, 加入几滴浓盐酸调节溶液的ph 值至7.2,加水定容至 1l,分装备用。
【注意】sds的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的sds,10%sds溶液无须灭菌。
29.20×ssc 溶液
【配制方法】在800ml水中溶解175.3g nacl 和88.2g 柠檬酸钠, 加入数滴10mol/lnaoh 溶液调节ph 值至7.0,加水定容至 1l,分装后高压灭菌。
30.20×sspe 溶液
【配制方法】在800ml水中溶解17.5g nacl、27.6g nah2po4·h2o 和7.4g edta,用naoh 溶液调节ph 值至7.4(约需6.5ml10ml/l naoh),加水定容至1l,分装后高压灭菌。
31.100% c2hcl3o2溶液
【配制方法】在装有500g tca的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(m/v)
tca。
32.1mol/l tris溶液
【配制方法】在800ml水中溶解121.91g tris碱,加入浓hcl 调节ph 值至所需值。
phhcl 7.470ml 7.6 60ml 8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定ph 值,加水定容至1l,分装后高压灭菌。【注意】如 1mol/l 溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量tris溶液的ph 值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
tris溶液的ph 值因温度而异,温度每升高1℃,ph 值大约降低0.03个单位。例如: 0.05mol/l的溶液在5℃、25℃、和37℃时的ph 值分别为9.5、8.9 和8.6。33.tris缓冲盐溶液(tbs)(25mmol/ltris )
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g nacl、0.2g kcl 和3g tris碱,加入0.015g
酚并用hcl 调至ph 值至7.4,用蒸馏水定容至 1l,分装后在
151bf/in2(1.034 ×105pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存。
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